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App ID: FLM-T240007 Titank C18 PITC 柱前衍生法檢測中 17 種氨基酸 色譜柱： Titank C18 柱 250 mm× 4.6 mm，5μm ; （貨號：FMG-5560- E0NU） 柱溫: 35 ℃ 檢測波長: 254 nm; 流速: 1.0 mL /min 進(jìn)樣量: 5μL 流動(dòng)相: A:乙腈 B:0.1mol/L 醋酸鈉溶液
 說明：使用 Titank C18 色譜柱，成功采用 PITC 柱前衍生法分析 17 種氨基酸，相鄰色譜峰分離度均大于 1. 5。 建議可用 Titank C18 3u 250*4.6mm(貨號：FMG-5559-EONU)獲得更大的分離度。
注釋：本應(yīng)用摘自 Journal of Chinese Medicinal Materials DOI:10.13863/j. issn1001-4454.2019.06.025 《 PITC 柱前衍生 HPLC 測定烏梅 17 種氨基酸的含量》
柱前衍生法是一種常用的氨基酸檢測方法，它通過衍生化反應(yīng)將氨基酸轉(zhuǎn)化為更易檢測的化合物，從而提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性。在柱前衍生法檢測中，通常會(huì)涉及到多種氨基酸的測定，包括但不限于以下17種常見氨基酸：
### 1. 氨基酸種類
* **Asp（天冬氨酸）** * **Thr（蘇氨酸）** * **Ser（絲氨酸）** * **Glu（谷氨酸）** * **Pro（脯氨酸）** * **Gly（甘氨酸）** * **Ala（丙氨酸）** * **Cys（胱氨酸）**（注意：有時(shí)也指半胱氨酸，具體取決于實(shí)驗(yàn)條件和需求） * **Val（纈氨酸）** * **Met（蛋氨酸）**（也稱甲硫氨酸） * **Ile（異亮氨酸）** * **Leu（亮氨酸）** * **Tyr（酪氨酸）** * **Phe（苯丙氨酸）** * **Lys（賴氨酸）** * **His（組氨酸）** * **Arg（精氨酸）** * **Trp（色氨酸）**（注意：色氨酸在酸水解過程中可能會(huì)被破壞，因此在某些檢測方法中可能不包括在內(nèi)）
### 2. 柱前衍生法檢測步驟
柱前衍生法檢測氨基酸的一般步驟包括樣品前處理、衍生化反應(yīng)、高效液相色譜（HPLC）分析等。以下是一個(gè)簡化的流程：
#### 樣品前處理
* 將樣品中的蛋白質(zhì)通過酸水解（如鹽酸水解）轉(zhuǎn)化為游離氨基酸。 * 過濾或離心去除雜質(zhì)，得到純凈的游離氨基酸溶液。
#### 衍生化反應(yīng)
* 將游離氨基酸與衍生試劑（如異硫氰酸苯酯、鄰苯二甲醛等）反應(yīng)，生成具有紫外吸收或熒光特性的衍生物。 * 衍生化反應(yīng)通常在室溫下進(jìn)行，并需要一定的反應(yīng)時(shí)間（如1小時(shí)）。
#### 高效液相色譜分析
* 將衍生后的樣品注入HPLC系統(tǒng)進(jìn)行分析。 * 根據(jù)不同氨基酸衍生物在色譜柱上的保留時(shí)間和紫外吸收強(qiáng)度進(jìn)行定性和定量測定。
### 3. 柱前衍生法的優(yōu)點(diǎn)
* **高靈敏度**：通過衍生化反應(yīng)提高了氨基酸的檢測靈敏度。 * **高分辨率**：HPLC技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)多種氨基酸的有效分離。 * **準(zhǔn)確性高**：外標(biāo)法定量準(zhǔn)確可靠。
### 4. 注意事項(xiàng)
* 在進(jìn)行柱前衍生法檢測時(shí)，需要注意控制實(shí)驗(yàn)條件（如溫度、pH值、反應(yīng)時(shí)間等），以確保衍生化反應(yīng)的完全性和一致性。 * 色氨酸在酸水解過程中可能會(huì)被破壞，因此在使用酸水解法時(shí)需要特別注意其穩(wěn)定性。 * 衍生試劑的選擇和用量也會(huì)影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。
綜上所述，柱前衍生法是一種有效且常用的氨基酸檢測方法，能夠準(zhǔn)確測定包括17種常見氨基酸在內(nèi)的多種氨基酸。在實(shí)際應(yīng)用中，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件和需求選擇合適的衍生試劑和HPLC條件，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
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